1. 成鹽。 稱取粗品肝素鈉 30g，向其中加入適量純化水溶解，得肝素鈉溶液；稱取芐索氯銨75g，向其中加入純化水溶解，得芐索氯銨溶液。 將芐索氯銨溶液緩慢加入到肝素鈉溶液中，邊加邊攪拌，攪拌均勻后，靜置2小時。 然后用離心機(jī)進(jìn)行離心操作，將離心所得固體用純化水進(jìn)行洗滌，最后將所得肝素芐索氯銨鹽濕品進(jìn)行真空干燥即可得肝素芐索氯銨鹽。 [2]
2. .酯化。 向所得的肝素芐索氯銨鹽中加入5倍體積的二氯甲烷，攪拌溶解后再向其中加入肝素芐索氯銨鹽1倍體積的氯化芐，維持溫度 35℃，攪拌反應(yīng) 24小時，反應(yīng)結(jié)束加入肝素芐索氯銨鹽6倍體積的10%乙酸鈉甲醇溶液， 攪拌10分鐘，靜置4小時，對沉淀進(jìn)行過濾，將過濾的沉淀用甲醇反復(fù)洗滌兩次得肝素芐酯濕粗品。向肝素芐酯濕粗品中加入肝素芐索氯銨鹽重量3倍體積的8%氯化鈉水溶液， 攪拌至完全溶解，再加入氯化鈉溶液體積4倍的甲醇，繼續(xù)攪拌10分鐘，靜置2小時，過濾重復(fù)此操作三次，即得肝素芐酯濕品。將肝素芐酯濕品進(jìn)行真空干燥，即可得肝素芐酯。
3. 解聚。 向肝素芐酯中加入其重量20倍體積的純化水，邊攪拌邊溶解，同時升溫至60℃。稱取肝素芐酯重量10%的氫氧化鈉用純化水溶解， 然后緩慢加入到肝素芐酯溶液中，維持溫度60℃，攪拌反應(yīng)2小時，然后用適量鹽酸調(diào)節(jié)溶液pH6.0~6.5，將溶液降溫至常溫，得解聚液。 向解聚液中加入適量氯化鈉，使其濃度為10%，攪拌至完全溶解，然后攪拌狀態(tài)下加入肝素芐酯重量60倍體積的甲醇， 攪拌均勻后靜置5小時，分離上清即可得依諾肝素鈉濕粗品。 [2]
4. 氧化醇沉。 向依諾肝素鈉濕粗品中加入其重量3倍體積的純化水，攪拌至完全溶解，補(bǔ)加純化水，使溶液濃度為20%。 然后加入溶液體積1%的氯化鈉，攪拌下，升溫至35℃，用氫氧化鈉調(diào)溶液 pH 至9.5~10.0；再加入溶液體積1%的過氧化氫（濃度為30%），維持溫度、pH，氧化8小時，得氧化液。 將氧化液經(jīng)0.45μm 濾芯過濾，用鹽酸調(diào) pH6.0~6.5，攪拌狀態(tài)下，加入濾液體積5倍的甲醇，攪拌均勻，靜置5小時，分離上清，即可得依諾肝素鈉氧化醇沉品。 [2]
5. 除菌過濾。 向氧化醇沉品中加入適量純化水，使其濃度為25%，攪拌至完全溶解后，將溶液經(jīng)濾芯過濾。 將除菌過濾液經(jīng)凍干機(jī)干燥，粉碎混合后即可得依諾肝素鈉精品。
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