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2024-06-11

肝素鈉分子呈與分子量分布

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照分子排阻色譜法(通則0514)測(cè)定。
供試品溶液:取本品適量,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1mL中約含5mg的溶液。
對(duì)照品溶液:取肝素分子量對(duì)照品適量,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1mL中約含5mg的溶液。
系統(tǒng)適用性溶液:取肝素分子量系統(tǒng)適用性對(duì)照品適量,加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每1mL中約含5mg的溶液。
色譜條件:以親水改性鍵合硅膠為填充劑(TSK預(yù)柱,6mm×40mm,TSKgel G4000SWXL,7.8mm×300mm,TSKgel G3000SWXL,7.8mm×300mm,串聯(lián)使用),以0.1mol/L醋酸銨溶液為流動(dòng)相,流速為每分鐘0.6mL,柱溫為30℃,示差折光檢測(cè)器,進(jìn)樣體積25μL。
系統(tǒng)適用性要求:系統(tǒng)適用性溶液色譜圖中,主峰與溶劑峰能夠徹底洗脫,重均分子量應(yīng)在標(biāo)示值±500范圍內(nèi)。
測(cè)定法:取對(duì)照品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖。準(zhǔn)確計(jì)算對(duì)照品溶液色譜圖中肝素峰的總面積(不包括鹽峰)及每個(gè)點(diǎn)的累積峰面積百分比,確定與肝素分子量對(duì)照品附帶的寬分布標(biāo)樣表中累積峰面積百分比最接近點(diǎn)的保留時(shí)間及對(duì)應(yīng)的分子量,以保留時(shí)間為橫坐標(biāo),分子量的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo),使用GPC軟件,擬合三次方程,建立校正曲線,相關(guān)系數(shù)應(yīng)不小于0.990。
另取供試品溶液,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,按下式計(jì)算本品的重均分子量。
式中,RIi為洗脫的i級(jí)分的物質(zhì)量,即示差色譜圖的峰高;
Mi為由校正曲線計(jì)算得出的i級(jí)分的分子量。
限度:重均分子量應(yīng)為15000~19000,分子量大于24000的級(jí)分不得大于20%,分子量8000~16000的級(jí)分與分子量16000~24000的級(jí)分比應(yīng)不小于1.0。

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