一、原料處理:將新鮮的豬腸(或冷凍豬腸自然解凍之后)用清水仔細(xì)清洗去除內(nèi)外污物和外部皮膚脂肪后,絞碎成糜狀,并在充分?jǐn)嚢柘?,加入等量的水混合后,再加入少許溶度為0.1%的防腐劑混合均勻。
二、酶解提?。合葘⑸鲜鲈显诔浞?jǐn)嚢柘?,用少量稀堿液精細(xì)地調(diào)節(jié)至PH值為8-9(可用相應(yīng)的精密PH試紙進(jìn)行測(cè)定,下同)再加入事先已經(jīng)絞碎的新鮮胰漿作為酶解劑(所加入的豬胰漿按照原料液實(shí)際重量的1%-1.5%為宜),攪勻后,緩慢升溫至40度左右,繼續(xù)攪拌,并保持料液PH=7.5-8,保持液溫于37-40度下,酶解3-4小時(shí),然后升溫至47-50度,維持PH值=8.0-8.5,再酌情補(bǔ)加少許豬胰漿后,繼續(xù)酶解4-5小時(shí),在上述酶解過程中,如果酶解料液的PH紙復(fù)查有所下降之際,句應(yīng)該及時(shí)用少許稀堿液(5%-8%NaOH溶液)仔細(xì)調(diào)整。鹽酸調(diào)整其PH=5.5-6,然后升溫至80度。在充分?jǐn)嚢柘?,加入料液總重?%左右的精鹽(含NaCL≥95%,鈣鎂鈣鹽<0.5%),使之混溶均勻后,再升溫90度,保溫30分鐘,停止攪拌,趁熱過濾除去雜質(zhì),待濾液冷卻至37度時(shí),用稀堿液調(diào)整其PH=10.5,精細(xì)過濾,濾液回調(diào)其PH=9.0-9.5范圍內(nèi)進(jìn)行離子交換吸附處理。
三、離子交換吸附;先將上述酶解提取液冷卻至室溫,仔細(xì)撈除浮于液面的油脂薄片層,控制升溫至45度,停止加熱,在攪拌下加入事先預(yù)處理好的D-254型樹脂已有效的吸附料液中的肝素鈉成分,新樹脂的用量一般為料液的2.55-3%,用過后的再生熟知應(yīng)酌情加大其用量,攪拌、吸附處理3個(gè)小時(shí)后靜置過濾,濾液可作為生產(chǎn)治療冠心病的新藥冠心舒的原料。
將上述已經(jīng)吸附有肝素成分的D-254樹脂先用清水充分漂洗,干凈后,再用大約一倍的1.2mol/L氯化鈉溶液對(duì)洗滌好的D-254樹脂進(jìn)行肝素鈉操作:第一次洗脫液為樹脂體積的1.5倍左右,大約洗脫4小時(shí),第二次洗脫為樹脂體積的0.5倍左右 ,洗脫時(shí)間為1小時(shí)。濾干樹脂,將洗脫液予以合并。 將上述所得的洗脫液調(diào)節(jié)到PH=10-11,攪拌30分鐘后,靜置6小時(shí),然后仔細(xì)的析出上層清液,下部沉淀物盡量的抽濾至干。合并清液和濾液,精細(xì)調(diào)節(jié)PH=6.0-6.5,加入1.5倍量的95%乙醇沉淀過夜,翌日,仔細(xì)地烘吸出上層清液,收集下部沉淀物,抽濾至干(母液可套用于調(diào)PH值前的洗脫液中)。經(jīng)真空烘干,即得肝素鈉粗品。
四、精制:將所得肝素鈉粗品用2%的氯化鈉溶液完全溶解,制成其溶度大約為8%的溶液,在此過程中可適當(dāng)?shù)纳郎刂堋?將上述料夜用5mol/L氫氧化鈉溶液精細(xì)地調(diào)節(jié)PH=8.0-8.2,升溫至78-80度,按照每一億單位加入0.15-0.2mol/L高錳酸鉀溶液至紫紅色不再褪色時(shí)即為第一次氧化操作的終點(diǎn);再加入少許飽和的亞硫酸鈉溶液以紅色剛好褪盡時(shí)為宜。 待上述料液適當(dāng)冷卻后, 精細(xì)過濾一次,當(dāng)其濾液溫度下降至36度時(shí),復(fù)濾一次,將濾液用少許飽和的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH=10.5-11.0,在充分?jǐn)嚢柘?,緩慢的加入少量?%-5%過氧化氫溶液,在25-27度下進(jìn)行第二次氧化,時(shí)間為16-24小時(shí),當(dāng)氧化過程結(jié)束后,將料液用“除菌過濾器”過濾,濾液用少許鹽酸調(diào)節(jié)至PH=5.8-6.5,加入0.9倍量的95%乙醇,于5-10度條件下沉淀處理24小時(shí)。 收集上述沉淀物,用少量10%氯化鈉溶液溶解后,再加上3-4倍的95%乙醇進(jìn)行沉淀,收集沉淀物(乙醇加以回收、蒸餾、脫水后,可循環(huán)套用)。沉淀物經(jīng)無水乙醇脫水,研細(xì),再經(jīng)丙酮脫水,研細(xì),再經(jīng)丙酮脫水,遠(yuǎn)紅外線真空烘干(50-60度),即得肝素鈉精品。
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